HPLC là gì?

HPLC viết tắt của High Performance Liquid Chromatography. Sắc ký lỏng HPLC là một kỹ thuật để tách hỗn hợp các chất thành các thành phần riêng biệt dựa trên sự tương tác giữa chất phân tích với pha động (thường là chất lỏng) và pha tĩnh (thông thường là các chất rắn). Pha động mang theo chất phân phân tích di chuyển qua pha tĩnh đứng yên. Các thành phần trong mẫu tương tác mạnh với pha tĩnh sẽ di chuyển chậm hơn so với các thành phần có tương tác yếu hơn.

Sơ đồ nguyên lý cơ bản hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC

Sắc ký pha đảo là phương thức phân tách HPLC được sử dụng phổ biến nhất. Kĩ thuật này vượt trội hơn so với các phương pháp khác về sự đa dạng của các hợp chất mà nó phân tách được. Hiện tượng chiếm ưu thế nhằm lưu mẫu trong một cột sắc ký pha đảo là tương tác kỵ nước giữa pha rắn và mẫu.

Tại sao phải kiểm soát độ pH?

Trong sắc ký HPLC pha đảo, chất phân tích được lưu lại có liên quan tới tính ưa nước của chúng. Chất phân tích càng ưa nước thì thời gian lưu càng lâu. Khi chất phân tích bị ion hóa, nó trở nên ít ưa nước hơn và do đó bị rửa giải.

Khi mẫu chứa các hợp chất có thể bị ion hóa, pH của pha động có thể là một trong những biến số quan trọng nhất trong việc kiểm soát độ lưu giữ trong quá trình tách HPLC pha đảo (RP-HPLC). Tuy nhiên, nếu không được kiểm soát đúng cách, pH có thể là nguồn gốc của nhiều vấn đề. Vì hầu hết các hợp chất được phân tích bằng RP-HPLC chứa một hoặc nhiều nhóm axit hoặc nhóm chức cơ bản, hầu hết các pha động đều yêu cầu kiểm soát độ pH.

Khi phân tách hỗn hợp có chứa các axit và/hoặc các ba zơ bằng sắc ký pha đảo, cần kiểm soát độ pH của pha động bằng dung dịch đệm phù hợp để thu được kết quả có độ lặp lại cao.

Khi axit mất đi 1 proton (H+) trở thành ion âm (độ pH tăng lên), thời gian lưu bị giảm đi.

Khi ba zơ nhận 1 proton (H+) trở thành ion dương (độ pH giảm đi), thời gian lưu tăng lên.

Tham khảo thêm về các thiết bị đo pH của hãng Horiba (Nhật Bản) để kiểm soát môi trường mẫu trong các thí nghiệm phân tích HPLC: